菌种名称：白色念珠菌 菌种编号：(CMCC(F)98001)    

一、目的：确保菌株的质量，对实验室的标准菌株进行合理的保存，方便管理和使用。

二、标准菌株复苏及增菌

用75%酒精浸泡过的脱脂棉擦净安瓿管，将冻干管尖端放在酒精灯火焰上加热，用消毒后的剪刀取下外部瓶盖，并将冻干管开口处在酒精灯火焰上加热灭菌，并保持在火焰旁操作。用无菌吸管吸取0.1mL~0.2mL复苏液，滴入管内，待安瓿管内的牛奶菌粉溶解，再用无菌吸管，吸取全部菌悬液接在1~2支装有5mL沙氏液体培养基试管后，在28.0℃下培养18h～24h。（经过冷冻干燥保存后，复苏时间较长，可适当延长培养时间。观察液体培养基有浑浊现象再进行下一步。

三、鉴别培养

用灭菌后的接种环取适量的上述沙氏液体培养基菌悬液划线接种于沙氏琼脂培养基平皿，在28.0℃下培养 72h，观察菌落形态。应为圆形或卵圆形，灰白色。

菌株保藏

1、瓷珠冻存管保藏法

操作步骤：在无菌条件下，用75%酒精浸泡过的脱脂棉擦净冻存管表面并让其自然风干，打开冻存管的螺旋瓶盖，用灭菌的接种环挑取适量经鉴别培养后的新鲜纯菌培养物，放入冻存液中；拧紧瓶盖，来回颠倒使菌体乳化为混浊的菌悬浊液，此时菌悬浊液会吸附在小瓷珠内外表面；用无菌移液管将冻存管中多余的菌悬浊液尽量吸出（吸出的菌悬浊液应放入75%酒精消毒液中并随后进行高压灭菌处理）；拧紧瓶盖制备成标准储备菌株冻存管并贴上相应的详细标签，并做好相关菌种记录，将冻存管置于-20℃冰箱中密封上锁保存。（-20℃可保存一年）。

冻存管的使用：取出冻存管并用力摇晃，使瓷珠均匀分散在管内；无菌条件下拧开冻存管，用无菌镊子取出一颗小瓷珠（小瓷珠从冻存管取出后不得放回），拧紧瓶盖；尽可能快的将冻存管放回原来的保存环境（温度过多的改变会降低菌体的生存能力），将小瓷珠直接接种于适合的沙氏液体培养基。

2、斜面低温保藏法

无菌条件下，将标准菌株菌悬浊液，以无菌操作接种在10mL沙氏固体斜面培养基上，置于相应温度的培养箱中培养，待菌充分生长后，将砂芯硅胶塞部分用牛皮纸包扎好后，移至2~8℃的冰箱中保存，定期转种，转种频率为一月一次。

此保存方法方便平时实验对标准菌种的取用。

五、菌种的使用

购进的标准菌株，冻干粉末于2℃~8℃保藏，开启复活分离后菌株以及其他须保管的菌株应填写菌株使用记录表，记录菌种名称、编号、来源、复活分离时间、传代数、保管条件、保管时间等。

废弃的菌种、盛放的容器及其它使用的废弃物需经高温消毒灭菌处理（121℃ 30min）后方可丢弃，实验完后的工作台及实验室设备设施及时进行酒精消毒处理或紫外灯灭菌处理，填写相关仪器设备使用消毒记录，以便追溯，严防污染。

（检验分析中心）