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高压蒸汽灭菌器灭菌效果的监测

发布:2019-12-13 阅读:120

    高压蒸汽灭菌器适用于棉布(签)、金属、陶瓷、搪瓷、玻璃、耐热用品、普通培养基、生理盐水、手术敷料等的灭菌,是目前医学及微生物检测中使用广泛,安全有效的灭菌方法。利用密闭的耐高压蒸气灭菌器(autoclave),在蒸气不外溢的条件下,使锅内压力增高,随之蒸气温度也增高。通常在103.4kPa压力下蒸气温度达到121.3℃,维持15-20分钟,可杀灭所有的繁殖体和芽胞。高压蒸汽灭菌方法具有灭菌效果可靠、热穿透力强、温度较高、处理后可随即进行干燥的优点。

    高压蒸汽灭菌器灭菌效果关系到最终试验结果的成败,因此,实验室要定期对高压蒸汽灭菌器灭菌效果进行监测,目前监测的方法主要有以下三种:

1.化学指示卡

    化学指示卡上的指示色块,在高压蒸气灭菌时,由淡黄色变为黑色。随着颜色变化的深浅,并与对照色相比,可判断灭菌效果是否达到要求。化学指示卡应在干燥处保存。遇潮会变色,影响灭菌效果的观测。

    化学指示卡只能监测灭菌锅的灭菌温度,并不能准确监测灭菌时间,通过颜色变化来达到监测效果。优点是使用方便快捷,缺点是不能准确监测灭菌时间。如果高压锅使用的频率较高,建议每次都在需要灭菌的的材料外侧使用过程化学指示卡(包外卡)作为标识。

    化学指示卡分类:从灭菌器的使用层面上分为3类:高、低环氧乙烷(EO)低温灭菌器包括:过氧化氢等离子体(plasma)灭菌器低温蒸汽甲醛灭菌器(LTSF))、环氧乙烷(EO)灭菌器。从灭菌化学指示卡本质层面上可分为以下6类

    1类:过程化学指示卡(包外卡)用于单个物品或包装,指示物品是否经过了灭菌过程,以区分灭菌或为灭菌物品,包括指示胶带、塑封袋边缘试纸、生物指示剂标签等

    2类:特殊检测化学指示卡(包内卡):用于灭菌器或灭菌标准的特效实验操作,如各种B-D试纸。检测预真空灭菌器冷空气排出效果和饱和蒸汽的穿透效果以及漏气情况

    压力蒸汽灭菌器每日使用前必须进行1次BD试验。方法:将BD试验专用的化学指示图平放于实验包的中心,用双层包布包裹以后,将测试包水平放置于柜室底层靠近柜门与排气口处进行实验。除测试包外,柜内不放置任何物品;在134 ℃,4 min后,取出BD测试纸观察颜色变化,如BD测试纸变色一致均匀,说明冷空气排除完全,可以使用;如BD测试纸变色不均匀,说明灭菌器有冷空气残留,不能使用,需要检修。

    3类:单一参数化学指示卡(包内卡):用于灭菌过程中单一参数的测试,如气体浓度卡(EO、甲醛等)

    4类:多参数化学指示卡(包内卡)具有两个或两个以上关键参数(时间、温度、湿度、气体浓度、蒸汽饱和程度)

    5类:综合参数化学指示卡(包内卡)是一种专用于对各灭菌过程中规定范围内的所有参数起作用的指示卡,其设定值需达到灭活值。它检测的灭菌过程关键参数应等于或超过标准ISO 1138对生物指示物的性能要求。性能等同或高于生物指示物。

    6类:模拟化学指示卡(包内卡)用于对各灭菌周期的所有评价参数起作用的指示卡,其设定值以所选的灭菌程序设置值为依据。周期确认型指示剂:是灭菌循环验证指示物。它的参数最精确。不同的指示剂必须要于每一不同的周期中,印有颜色变化染料的纸片

    4、5、6类放在每一灭菌包内,用于检测小范围问题,不能提示整批次微生物已被杀灭,批次检测需要用化学批量PCD(有植入型物品是需同时放入生物监测指示剂)

2.留点温度计

    留点温度计包括双金属留点温度计水银留点温度计实验室用的工业留点温度计,设计的温度要比体温计高得多,一般是在负10度至300度之间。

    水银留点温度计是指水银柱指示的位置不随着温度的下降而下降,仍留在并指示着曾经达到过的最高点。像我们所用的体温计就是这样一种温度计,留点温度计需经检定合格后方可用于验证试验。检测前,需将温度计的水银柱甩至40℃以下把水银温度计放在盛水的大三角瓶里,灭菌时把三角瓶放在灭菌器的上部和下部,灭菌结束后看水银温度计的温度和要求温度是否一致。每次监测后留点温度计的温差应在1℃之间,则说明灭菌器内的温度分布是均匀的。

    如果高压锅使用的频率较高,建议每个月用留点温度计对高压锅灭菌效果进行监测。

3.生物指示剂

    生物指示剂是一类特殊的活微生物制品,可用于确认灭菌设备的性能,灭菌程序的验证,生产过程灭菌效果的监控等。

    生物指示剂(嗜热脂肪芽孢杆菌菌片)(以下简称菌片)用无菌镊子放人密封试管中,置于试验包中心部位,化学指示卡和留点温度计放入敞口试管中。以上两种试管各准备5-10份。分别放置在高压灭菌器蒸气口处、底部排气口处及底部出水口处或上下左右中间5处。如灭菌器为二层,则需放10处。

灭菌后的菌片应在严格无菌操作条件下放入灭菌后的溴甲酚紫胨水培养基内56±2℃温度培养24-48小时,观察颜色变化。如培养基变为黄色,说明菌片中的嗜热脂肪芽胞杆菌尚未完全灭活,细菌仍可在培养基中生长,分解葡萄糖产酸变为黄色。如培养基颜色不变化仍为紫色,则说明芽胞已灭活。同时要用未经灭菌的纸片放入培养基内作为阳性对照,不加纸片的空白培养基作为阴性对照。  

1)按结构分可分为片状生物指示剂和自含式生物指示剂。一般来说都是用的自含式的多,就是里面有菌片,外面是密封的安瓿。

    2)按培养时间可分为通用型生物指示剂和快速型生物指示剂。通用型生物指示剂根据芽孢复苏后指示菌种新陈代谢引起培养液pH改变,通过酸碱指示剂变色来进行判读,时间一般在24或48小时以上;而快速型生物指示剂根据芽孢复苏后的酶促反应,通过荧光进行判读,时间一般为3-4小时,同时国外正在研发更加快速的生物指示剂,有望在1小时之内得出结果。

    生物指示剂也是GB15981-1995《消毒与灭菌效果的评价方法与标准》中推荐使用的压力蒸汽灭菌效果的监测方法。优点是能够准确监测灭菌温度和时间是否满足灭菌要求,缺点是检测鉴别所需时间较长。

 

示例:

嗜热脂肪芽孢杆菌生物指示剂
型号:H3723
用途∶适用于医院消毒、检验检测、卫生材料生产企业等机构
指标菌∶Geobacillus stearothermophilus嗜热脂肪芽孢杆菌
芽孢数∶1×105以上
包装∶25支/盒
压力蒸汽灭菌生物指示剂又名嗜热脂肪芽孢杆菌生物指示剂,是由嗜热脂肪杆菌芽孢菌片(ATCC7953)、培养基及塑料外壳组成自含式生物指示剂。菌片含菌量为1×105~5×105cfu/片。D值为1.3~1.9分钟。在121℃±0.5℃饱和蒸汽条件下,存活时间≥3.9分钟,杀灭时间≤19分钟。 

使用方法

1.在ACE test(灭菌生物指示剂表面的标签空白处,用油性笔记录灭菌管理的必要事项。(如:灭菌处理日期、位置等)根据标签的化学指示剂变化,可区分有否经灭菌处理。 
2.将ACE test数支横放在灭菌器内不易被灭菌完全的位置。
3.灭菌处理后,将ACE test取出,确认标签上的化学指示剂由蓝色变成黑色后,放置15分钟以上冷却至室温。
4.将完全冷却后的ACE test垂直放入夹子中,直到塑料管底部完全安定,手指按夹子上部将内部玻璃管夹破。此阶段吸附芽孢的纸片接触培养液,培养准备完毕,请确认纸片是否浸在培养液中并及时培养。
5.在56±2℃温度间将ACE test竖着进行培养。为了便于对照,用同一批号未使用的ACE test,在玻璃管夹破后,同时进行培养。经24小时、48小时或7天培养,可确认灭菌效果
6.确认灭菌效果后,将标签取下粘贴在记录薄留存。

(检验分析中心)

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